Leica Patio Umbrella HMB45 User Manual

BondReady-to-Use Primary Antibody  
Melanoma Marker (HMB45)  
Catalog No: PA0027  
Leica Biosystems Newcastle Ltd  
Balliol Business Park West  
Benton Lane  
Newcastle Upon Tyne NE12 8EW  
United Kingdom  
EN  
FR  
IT  
DE  
ES  
PT  
SV  
EL  
DA  
(
+44 191 215 4242  
Instructions for Use  
Please read before using this product.  
Mode d’Emploi  
Á lire avant d’utiliser ce produit.  
Istruzioni per l’uso  
Si prega di leggere, prima di usare il prodotto.  
Gebrauchsanweisung  
Bitte vor der Verwendung dieses Produkts lesen.  
Instrucciones de Uso  
Por favor, leer antes de utilizar este producto.  
Instruções de Utilização  
Leia estas instruções antes de utilizar este produto.  
Instruktioner vid användning  
Var god läs innan ni använder produkten.  
Οδηγίες Χρήσης  
Παρακαλούμε διαβάστε τις οδηγίες πριν χρησιμοποιήσετε το προϊόν αυτό.  
Brugsanvisning  
Læs venligst før produktet tages i brug.  
Check the integrity of the packaging before use.  
Vérifier que le conditionnement est en bon état avant l’emploi.  
Prima dell’uso, controllare l’integrità della confezione.  
Vor dem Gebrauch die Verpackung auf Unversehrtheit überprüfen.  
Comprobar la integridad del envase, antes de usarlo.  
Verifique a integridade da embalagem antes de utilizar o produto.  
Kontrollera att paketet är obrutet innan användning.  
Ελέγξτε την ακεραιότητα της συσκευασίας πριν από τη χρήση.  
Kontroller, at pakken er ubeskadiget før brug.  
 
BondReady-To-Use Primary Antibody  
Melanoma Marker (HMB45)  
Catalog No: PA0027  
Intended Use  
This reagent is for in vitro diagnostic use.  
Melanoma Marker (HMB45) monoclonal antibody is intended to be used for the qualitative identification by light microscopy of human  
HMB45 antigen in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue by immunohistochemical staining using an automated Bond system.  
The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies and proper controls and  
should be evaluated within the context of the patient’s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist.  
Summary and Explanation  
Immunohistochemical techniques can be used to demonstrate the presence of antigens in tissue and cells (see “Using Bond Reagents”  
in your Bond user documentation). Melanoma Marker (HMB45) primary antibody is a ready-to-use product that is recommended for use  
with either the Bond Polymer Refine Detection or Bond Polymer Refine Red Detection. The demonstration of human HMB45 antigen is  
achieved by first allowing the binding of Melanoma Marker (HMB45) to the section, and then visualizing this binding using the reagents  
provided in the detection system. The use of these products, in combination with an automated Bond system, reduces the possibility of  
human error and inherent variability resulting from individual reagent dilution, manual pipetting and reagent application.  
Reagents Provided  
Melanoma Marker (HMB45) is a mouse anti-human monoclonal antibody produced as a tissue culture supernatant, and supplied in Tris  
buffered saline with carrier protein, containing 0.35% ProClin950 as a preservative.  
Total volume = 7 mL.  
Clone  
HMB45.  
Immunogen  
Extract of pigmented melanoma metastases from lymph nodes.  
Specificity  
Human HMB45 antigen.  
Subclass  
IgG1, Kappa.  
Total Protein Concentration  
Approx 10 mg/mL.  
Antibody Concentration  
Greater than or equal to 1.3 mg/L as determined by ELISA.  
Dilution and Mixing  
Melanoma Marker (HMB45) primary antibody is optimally diluted for use on the automated Bond system. Reconstitution, mixing, dilution  
or titration of this reagent is not required.  
Materials Required But Not Provided  
Refer to “Using Bond Reagents” in your Bond user documentation for a complete list of materials required for specimen treatment and  
immunohistochemical staining using the automated Bond system.  
Storage and Stability  
Store at 2–8 °C. Do not use after the expiration date indicated on the container label.  
The signs indicating contamination and/or instability of Melanoma Marker (HMB45) are: turbidity of the solution, odor development, and  
presence of precipitate.  
Return to 2–8 °C immediately after use.  
Storage conditions other than those specified above must be verified by the user1.  
Precautions  
This product is intended for in vitro diagnostic use.  
The concentration of ProClin950 is 0.35%. It contains the active ingredient 2-methyl-4-isothiazolin-3-one, and may cause irritation  
to the skin, eyes, mucous membranes and upper respiratory tract. Wear disposable gloves when handling reagents.  
To obtain a copy of the Material Safety Data Sheet contact your local distributor or regional office of Leica Biosystems, or alternatively,  
Specimens, before and after fixation, and all materials exposed to them, should be handled as if capable of transmitting infection and  
disposed of with proper precautions2. Never pipette reagents by mouth and avoid contacting the skin and mucous membranes with  
reagents or specimens. If reagents or specimens come in contact with sensitive areas, wash with copious amounts of water. Seek  
medical advice.  
PA0027  
 
Page 2  
Consult Federal, State or local regulations for disposal of any potentially toxic components.  
Minimize microbial contamination of reagents or an increase in non-specific staining may occur.  
Retrieval, incubation times or temperatures other than those specified may give erroneous results. Any such change must be  
validated by the user.  
Instructions for Use  
Melanoma Marker (HMB45) primary antibody is recommended for use on an automated Bond system in combination with either  
Bond Polymer Refine Detection (DS9800) or Bond Polymer Refine Red Detection (DS9390). The recommended staining protocols for  
Melanoma Marker (HMB45) primary antibody are IHC Protocol F when using Bond Polymer Refine Detection and IHC Protocol J when  
using Bond Polymer Refine Red Detection. Enzyme pretreatment is recommended using Bond Enzyme 1 for 5 minutes.  
Results Expected  
Normal Tissues  
Melanoma Marker (HMB45) showed positive granular, cytoplasmic staining in melanocytes in the basal layer of epidermis. All other  
normal tissues were negative. (Total number of cases stained = 99).  
Tumor Tissues  
Melanoma Marker (HMB45) stained 13/13 malignant melanomas. No staining was observed in a variety of other tumors. (Total number  
of cases stained = 101).  
Melanoma Marker (HMB45) is recommended for use as part of a panel of antibodies for the diagnosis of melanomas.  
Product Specific Limitations  
Melanoma Marker (HMB45) is recommended for use with either Bond Polymer Refine Detection or Bond Polymer Refine Red Detection  
and Bond ancillary reagents. Users who deviate from recommended test procedures must accept responsibility for interpretation  
of patient results under these circumstances. The protocol times may vary, due to variation in tissue fixation and the effectiveness  
of antigen enhancement, and must be determined empirically. Negative reagent controls should be used when optimizing retrieval  
conditions and protocol times.  
Troubleshooting  
Refer to reference 3 for remedial action.  
Contact your local distributor or the regional office of Leica Biosystems to report unusual staining.  
Further Information  
Further information on immunostaining with Bond reagents, under the headings Principle of the Procedure, Materials Required,  
Specimen Preparation, Quality Control, Assay Verification, Interpretation of Staining, Key to Symbols on Labels, and General Limitations  
can be found in “Using Bond Reagents” in your Bond user documentation.  
Bibliography  
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.  
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious  
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.  
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.  
4. Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, et al. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated  
with immature Melanoma Markers. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1992; 40(2):207-212.  
5. Gown AM, Vogel AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocytic tumours distinguish subpopulations of  
melanocytes. American Journal of Pathology. 1986;123(2):195-203.  
ProClin950 is a trademark of Supelco, a part of Sigma-Aldrich Corporation.  
Date of Issue  
09 May 2013  
PA0027  
 
Page 3  
Anticorps Primaire Prêt À LEmploi Bond™  
Melanoma Marker (HMB45)  
Référence: PA0027  
Utilisation Prévue  
Ce réactif est destiné au diagnostic in vitro.  
L’anticorps monoclonal Melanoma Marker (HMB45) est destiné à l’identification qualitative par microscopie optique de l’antigène  
humain HMB45 dans des tissus fixés au formol et enrobés de paraffine par coloration immunohistochimique à partir d’un système Bond  
automatisé.  
L’interprétation clinique de tout marquage ou de son absence doit être complétée par des études morphologiques utilisant des contrôles  
appropriés et évaluée dans le contexte des antécédents cliniques du patient et des autres tests diagnostiques par un pathologiste  
qualifié.  
Résumé et Explications  
Les techniques immunohistochimiques peuvent être utilisées pour la mise en évidence d’antigènes sur tissus ou cellules (voir “Utilisation  
des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation Bond). L’anticorps primaire Melanoma Marker (HMB45) est un produit prêt à l’emploi  
recommandé pour être utilisé soit avec le Bond Polymer Refine Detection ou le Bond Polymer Refine Red Detection. La démonstration  
de l’antigène humain HMB45 s’effectue d’abord par la liaison du Melanoma Marker (HMB45) à la coupe, et par la visualisation de cette  
liaison via les réactifs fournis dans le système de détection. L’utilisation de ces produits, en association avec l’automate Bond, réduit  
l’éventualité d’une erreur humaine et la variabilité intrinsèque résultant de la dilution, du pipetage manuel et de l’application à titre  
individuel des réactifs.  
Réactifs Fournis  
Melanoma Marker (HMB45) est un anticorps monoclonal anti-humain de souris, produit par surnageant de culture de tissu et conditionné  
dans du tampon salin Tris contenant une protéine de transport et 0,35 % de ProClin950 (conservateur).  
Volume total = 7 ml.  
Clone  
HMB45.  
Immunogène  
Extrait de métastases de mélanomes pigmentés des noeuds lymphoïdes.  
Spécificité  
Antigène humain HMB45.  
Sous-classe  
IgG1, Kappa.  
Concentration Totale en Protéine  
Environ 10 mg/ml.  
Concentration en Anticorps  
Supérieure ou égale à 1,3 mg/l, déterminée par ELISA.  
Dilution et Mélange  
L’anticorps primaire Melanoma Marker (HMB45) est à dilution optimale pour utilisation dans l’automate Bond. Reconstitution, mélange,  
dilution ou titration de ce réactif non nécessaire.  
Matériel Nécessaire Mais Non Fourni  
Voir “Utilisation des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation Bond pour obtenir la liste complète du matériel nécessaire au  
traitement des échantillons et au marquage immunohistochimique avec le système Bond.  
Conservation et Stabilité  
Conserver à une température comprise entre 2–8 °C. Ne pas utiliser après la date de péremption indiquée sur l’étiquette du récipient.  
Les signes indicateurs d’une contamination et/ou d’une instabilité de Melanoma Marker (HMB45) sont les suivants : une turbidité de la  
solution, la formation d’odeurs et la présence d’un précipité.  
Remettre à 2–8 °C immédiatement après usage.  
Des conditions de stockage différentes de celles ci-dessus doivent être contrôlées par l’utilisateur1.  
Précautions  
Ce produit est conçu pour le diagnostic in vitro.  
La concentration en ProClin950 est de 0,35%. Contient du 2-méthyl-4-isothiazoline-3-one (ingrédient actif) et peut entraîner des  
irritations de la peau, des yeux, des muqueuses et des voies aériennes supérieures. Porter des gants jetables lors de la manipulation  
des réactifs.  
PA0027  
 
Page 4  
Pour obtenir un exemplaire de la fiche technique des substances dangereuses (Material Safety Data Sheet), contactez votre  
distributeur local ou le bureau régional de Leica Biosystems, ou consultez le site Web de Leica Biosystems :  
Les échantillons, avant et après fixation, et tous les matériels ayant été en contact avec eux, doivent être manipulés comme s’ils  
étaient à risque infectieux et éliminés avec les précautions adéquates2. Ne jamais pipeter les réactifs à la bouche et éviter le contact  
de la peau et des muqueuses avec les réactifs ou les échantillons. Si des réactifs ou des échantillons entrent en contact avec des  
zones sensibles, rincer abondamment à l’eau. Consultez un médecin.  
Renseignez-vous sur les règlements fédéraux, nationaux et locaux pour l’élimination des composés potentiellement toxiques.  
Éviter une contamination microbienne des réactifs, qui peut favoriser un marquage non spécifique.  
Des durées ou des températures de démasquage ou d’incubation autres que celles spécifiées peuvent entraîner des résultats  
erronés. Tout changement doit être validé par l’utilisateur.  
Mode d’Emploi  
L’anticorps primaire Melanoma Marker (HMB45) est recommandé pour être utilisé sur un système Bond automatisé en combinaison  
avec le Bond Polymer Refine Detection (DS9800) ou le Bond Polymer Refine Red Detection (DS9390). Les protocoles de coloration  
recommandés pour l’anticorps primaire Melanoma Marker (HMB45) sont l’IHC Protocol F pour l’utilisation du Bond Polymer Refine  
Detection et l’IHC Protocol J pour l’utilisation du Bond Polymer Refine Red Detection. Un prétraitement enzymatique est recommandé en  
utilisant Bond Enzyme 1 pendant 5 minutes.  
Résultats Attendus  
Tissus Sains  
Le Melanoma Marker (HMB45) a présenté une coloration cytoplasmique granulaire positive dans les mélanocytes de la couche basale  
de l’épiderme. Tous les autres tissus normaux étaient négatifs. (Nombre total de cas colorés = 99).  
Tissus Tumoraux  
Le Melanoma Marker (HMB45) a coloré 13/13 mélanomes malins. Aucune coloration n’a été observée dans les autres tumeurs.  
(Nombre total de cas colorés = 101).  
Melanoma Marker (HMB45) est recommandé pour être utilisé en tant que composant d’un panel d’anticorps pour le diagnostic  
de mélanomes.  
Limites Spécifiques du Produit  
Melanoma Marker (HMB45) est recommandé pour être utilisé soit avec le Bond Polymer Refine Detection ou le Bond Polymer Refine  
Red Detection et les réactifs auxiliaires Bond. Les utilisateurs qui s’écartent des procédures recommandées prennent la responsabilité  
de l’interprétation des résultats des patients dans ces conditions. Les durées du protocole peuvent varier, en raison des variations de  
fixation des tissus et de l’efficacité de la facilitation de l’antigène, et doivent être déterminées empiriquement. Des contrôles réactif  
négatifs doivent être testés lors de l’optimisation des conditions de démasquage et des durées du protocole.  
Identification des Problèmes  
Voir la référence 3 pour connaître les mesures correctives.  
Prenez contact avec votre distributeur local ou avec le bureau régional de Leica Biosystems pour signaler tout marquage inattendu.  
Informations Complémentaires  
Des informations complémentaires sur l’immunomarquage avec les réactifs Bond, les principes de la méthode, le matériel nécessaire, la  
préparation des échantillons, le contrôle qualité, les vérifications d’analyse, l’interprétation du marquage, les légendes et symboles sur  
les étiquettes et les limites générales, peuvent être obtenues dans “Utilisation des réactifs Bond” dans votre manuel d’utilisation Bond.  
Bibliographie  
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.  
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious  
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.  
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.  
4. Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, et al. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated  
with immature Melanoma Markers. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1992; 40(2):207-212.  
5. Gown AM, Vogel AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocytic tumours distinguish subpopulations of  
melanocytes. American Journal of Pathology. 1986;123(2):195-203.  
ProClin950 est une marque commerciale de Supelco, membre du groupe Sigma-Aldrich Corporation.  
Date de Publication  
09 mai 2013  
PA0027  
 
Page 5  
Anticorpo Primario Pronto All’Uso Bond™  
Melanoma Marker (HMB45)  
N. catalogo: PA0027  
Uso previsto  
Reagente per uso diagnostico in vitro.  
L’anticorpo monoclonale Melanoma Marker (HMB45) deve essere utilizzato per l’identificazione qualitativa tramite microscopio ottico  
dell’antigene umano HMB45 in tessuto fissato in formalina, incluso in paraffina tramite colorazione immunoistochimica con un sistema  
Bond automatizzato.  
L’interpretazione clinica di un’eventuale colorazione, o della sua assenza, deve avvalersi di studi morfologici e di opportuni controlli ed  
essere effettuata da patologi qualificati, nel contesto dell’anamnesi clinica del paziente e di altri test diagnostici.  
Sommario e spiegazione  
Grazie alle tecniche di immunoistochimica è possibile dimostrare la presenza di antigeni nel tessuto e nelle cellule (vedere “Uso dei  
reagenti Bond” nella documentazione per l’utente Bond). L’anticorpo primario Melanoma Marker (HMB45) è un prodotto pronto per  
l’uso che si raccomanda di utilizzare con Bond Polymer Refine Detection o Bond Polymer Refine Red Detection. La dimostrazione  
dell’antigene umano HMB45 si ottiene in primo luogo consentendo il legame del Melanoma Marker (HMB45) con la sezione, e quindi  
visualizzando il legame stesso per mezzo dei reagenti forniti nel sistema di rilevazione. L’impiego di questi prodotti, insieme al sistema  
automatizzato Bond, riduce la possibilità di un errore umano e la relativa variabilità che deriva dalla diluizione individuale del reagente e  
dal pipettamento e dall’applicazione del reagente eseguiti manualmente.  
Reagenti forniti  
Il Melanoma Marker (HMB45) è un anticorpo monoclonale murino anti-umano prodotto come surnatante di coltura tissutale e fornito in  
soluzione salina tamponata Tris con proteina carrier, contenente 0,35% di ProClin950 come conservante.  
Volume totale = 7 ml.  
Clone  
HMB45.  
Immunogeno  
Estratto di metastasi di melanoma pigmentato da linfonodi.  
Specificità  
Antigene umano HMB45.  
Sottoclasse  
IgG1, Kappa.  
Concentrazione proteica totale  
Circa 10 mg/ml.  
Concentrazione dell’Anticorpo  
Uguale o superiore a 1,3 mg/l, determinata mediante ELISA.  
Diluizione e miscelazione  
La diluizione dell’anticorpo primario Melanoma Marker (HMB45) è stata ottimizzata per l’uso con il sistema Bond. Non è necessario  
ricostituire, miscelare, diluire o titolare il reagente.  
Materiale necessario non fornito  
Per un elenco completo del materiale necessario per il trattamento del campione e la colorazione immunoistochimica con il sistema  
Bond, consultare l’”Uso dei reagenti Bond” nella documentazione per l’utente Bond.  
Conservazione e stabilità  
Conservare a 2–8 °C. Non utilizzare dopo la data di scadenza indicata sull’etichetta del contenitore.  
I segni di contaminazione e/o instabilità del Melanoma Marker (HMB45) sono: torbidità della soluzione, formazione di odori e presenza  
di un precipitato.  
Dopo l’uso riportare immediatamente a 2–8 °C.  
L’utente deve verificare eventuali condizioni di conservazione diverse da quelle specificate1.  
Precauzioni  
Il prodotto è destinato all’uso diagnostico in vitro.  
La concentrazione del ProClin950 è 0,35%. Esso contiene il principio attivo 2-metil-4-isotiazolin-3-one e può causare irritazione alla  
cute, agli occhi, alle mucose e alle alte vie respiratorie. Per la manipolazione dei reagenti usare guanti monouso.  
Una copia della Scheda di sicurezza può essere richiesta al distributore locale o all’ufficio di zona di Leica Biosystems o, in  
PA0027  
 
Page 6  
I campioni, prima e dopo la fissazione, e tutti i materiali esposti ad essi devono essere manipolati come potenziali vettori di infezione  
e smaltiti con le opportune precauzioni2. Non pipettare mai i reagenti con la bocca ed evitare il contatto dei reagenti e dei campioni  
con la cute e le mucose. Se un reagente o un campione viene a contatto con zone sensibili, lavare abbondantemente con acqua.  
Consultare un medico.  
Consultare la normativa nazionale, regionale o locale per lo smaltimento dei componenti potenzialmente tossici.  
Ridurre al minimo la contaminazione microbica dei reagenti per non incrementare il rischio di una colorazione non specifica.  
Tempi o temperature di incubazione o di riconoscimento diversi da quelli specificati possono fornire risultati erronei. Ogni eventuale  
modifica deve essere convalidata dall’utente.  
Istruzioni per l’uso  
Si raccomanda di utilizzare l’anticorpo primario Melanoma Marker (HMB45) su un sistema Bond automatizzato in associazione con  
Bond Polymer Refine Detection (DS9800) o Bond Polymer Refine Red Detection (DS9390). I protocolli di colorazione raccomandati per  
l’anticorpo primario Melanoma Marker (HMB45) sono IHC Protocol F se si utilizza Bond Polymer Refine Detection e IHC Protocol J se si  
utilizza Bond Polymer Refine Red Detection. Si consiglia il pretrattamento enzimatico con il Bond Enzyme 1 per 5 minuti.  
Risultati attesi  
Tessuti normali  
Il Melanoma Marker (HMB45) ha mostrato colorazione citoplasmatica, granulare positiva in melanociti nello strato basale  
dell’epidermide. Tutti i tessuti normali erano negativi. (Numero totale di casi colorati = 99).  
Tessuti tumorali  
Il Melanoma Marker (HMB45) ha colorato melanomi maligni (13/13). Non si è osservata nessuna colorazione in una serie di altri tumori.  
(Numero totale di casi colorati = 101).  
Si raccomanda di utilizzare il Melanoma Marker (HMB45) come parte di un pannello di anticorpi per la diagnosi di melanomi.  
Limitazioni specifiche del prodotto  
Si raccomanda di utilizzare il Melanoma Marker (HMB45) con Bond Polymer Refine Detection o Bond Polymer Refine Red Detection e  
reagenti sussidiari Bond. Gli utenti che modificano le procedure raccomandate devono assumersi la responsabilità dell’interpretazione  
dei risultati relativi ai pazienti in tali circostanze. I tempi del protocollo possono variare in base alle variazioni nella fissazione del tessuto  
e nell’efficienza del potenziamento dell’antigene e devono essere definiti in modo empirico. Nell’ottimizzazione delle condizioni di  
riconoscimento e dei tempi del protocollo si devono impiegare dei controlli negativi del reagente.  
Soluzione problemi  
Per i provvedimenti consultare il riferimento bibliografico n. 3.  
Per riferire una colorazione inusuale rivolgersi al distributore locale o all’ufficio di zona di Leica Biosystems.  
Ulteriori informazioni  
Ulteriori informazioni sull’immunocolorazione con i reagenti Bond si trovano in “Uso dei reagenti Bond” nella documentazione per  
l’utente Bond, ai titoli Principio della procedura, Materiali necessari, Preparazione del campione, Controllo di qualità, Verifica del saggio,  
Interpretazione della colorazione, Leggenda dei simboli e delle etichette e Limitazioni generali.  
Bibliografia  
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.  
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious  
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.  
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.  
4. Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, et al. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated  
with immature Melanoma Markers. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1992; 40(2):207-212.  
5. Gown AM, Vogel AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocytic tumours distinguish subpopulations of  
melanocytes. American Journal of Pathology. 1986;123(2):195-203.  
ProClin950 è un marchio di fabbrica di Supelco, società del gruppo Sigma-Aldrich.  
Data di pubblicazione  
09 maggio 2013  
PA0027  
 
Page 7  
Gebrauchsfertiger Bond-Primärantikörper  
Melanoma Marker (HMB45)  
Bestellnr.: PA0027  
Verwendungszweck  
Dieses Produkt ist für die In-vitro-Diagnostik bestimmt.  
Der monoklonale Antikörper Melanoma Marker (HMB45) ist für die qualitative lichtmikroskopische Identifizierung des humanen  
HMB45-Antigens in formalinfixiertem, in Paraffin eingebettetem Gewebe durch immunhistochemische Färbung mithilfe eines Bond-  
Färbeautomaten vorgesehen.  
Die klinische Auswertung der An- oder Abwesenheit einer Färbung sollte durch morphologische Untersuchungen und geeignete  
Kontrollen ergänzt werden und sollte im Zusammenhang mit der Krankengeschichte des Patienten und anderen diagnostischen Tests  
von einem qualifizierten Pathologen vorgenommen werden.  
Zusammenfassung und Erläuterung  
Immunhistochemische Methoden können dazu verwendet werden, die Anwesenheit von Antigenen in Geweben und Zellen zu  
demonstrieren (sehen Sie dazu “Das Arbeiten mit Bond-Reagenzien” in Ihrem Bond-Benutzerhandbuch). Der Primärantikörper  
Melanoma Marker (HMB45) ist ein gebrauchsfertiges Produkt, das zur Verwendung mit Bond Polymer Refine Detection oder Bond  
Polymer Refine Red Detection empfohlen wird. Der Nachweis des humanen HMB45-Antigens erfolgt durch Bindung von Melanoma  
Marker (HMB45) an das Präparat und anschließende Darstellung dieser Bindung mithilfe der im Detektionssystem enthaltenen  
Reagenzien. Die Verwendung dieser Produkte zusammen mit dem automatischen Bond-System reduziert die Wahrscheinlichkeit  
menschlicher Fehler und die natürlichen Schwankungen, die beim individuellen Verdünnen von Reagenzien, dem manuellen Pipettieren  
und dem Auftragen der Reagenzien entstehen.  
Mitgelieferte Reagenzien  
Melanoma Marker (HMB45) ist ein monoklonaler Maus-anti-Human Antikörper, der aus Zellkulturüberstand hergestellt wurde, in Tris-  
gepufferter Salzlösung mit einem Trägerprotein geliefert wird und 0,35% ProClin950 als Konservierungsmittel enthält.  
Gesamtvolumen = 7 ml.  
Klon  
HMB45.  
Immunogen  
Extrakt pigmentierter Melanommetastasen aus Lymphknoten.  
Spezifität  
Humanes HBM45-Antigen.  
Subklasse  
IgG1, Kappa.  
Gesamtproteinkonzentration  
Ca. 10 mg/ml.  
Antikörperkonzentration  
Größer als oder gleich 1,3 mg/l, bestimmt mit ELISA.  
Verdünnung und Mischung  
Der Primärantikörper Melanoma Marker (HMB45) ist optimal für den Gebrauch mit dem Bond-System verdünnt. Rekonstitution, Mischen,  
Verdünnen oder Titrieren dieses Reagenzes ist nicht erforderlich.  
Erforderliche, Aber Nicht Mitgelieferte Materialien  
Eine vollständige Liste der Materialien, die für die Probenbehandlung und die immunhistochemische Färbung mit dem Bond-System  
benötigt werden, befindet sich im Abschnitt “Das Arbeiten mit Bond-Reagenzien” in Ihrem Bond-Benutzerhandbuch.  
Lagerung und Stabilität  
Bei 2–8 °C lagern. Nach dem Ablauf des auf dem Behälteretikett angegebenen Verfallsdatums nicht mehr verwenden.  
Zeichen, die auf eine Kontamination und/oder Instabilität von Melanoma Marker (HMB45) hinweisen, sind eine Trübung der Lösung,  
Geruchsentwicklung und das Vorhandensein von Präzipitat.  
Unmittelbar nach Gebrauch wieder bei 2–8 °C aufbewahren.  
Andere als die oben angegebenen Lagerungsbedingungen müssen vom Anwender selbst getestet werden1.  
Vorsichtsmaßnahmen  
Dieses Produkt ist für die In-vitro-Diagnostik bestimmt.  
Die Konzentration von ProClin950 beträgt 0,35%. Es enthält 2-Methyl-4-isothiazolin-3-on als aktiven Bestandteil und kann  
Reizungen der Haut, Augen, Schleimhäute und oberen Atemwege verursachen. Tragen Sie beim Umgang mit Reagenzien  
Einweghandschuhe.  
PA0027  
 
Page 8  
Ein Exemplar des Sicherheitsdatenblattes erhalten Sie von Ihrer örtlichen Vertriebsfirma, von der Regionalniederlassung von Leica  
Behandeln Sie Präparate vor und nach der Fixierung sowie sämtliche damit in Berührung kommenden Materialien so, als ob diese  
Infektionen übertragen könnten und entsorgen Sie sie unter Beachtung der entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen2. Pipettieren Sie  
Reagenzien niemals mit dem Mund und vermeiden Sie den Kontakt von Haut und Schleimhäuten mit Reagenzien oder Präparaten.  
Falls Reagenzien oder Präparate mit empfindlichen Bereichen in Kontakt gekommen sind, spülen Sie diese mit reichlich Wasser.  
Holen Sie anschließend ärztlichen Rat ein.  
Beachten Sie bei der Entsorgung potentiell toxischer Bestandteile die behördlichen und örtlichen Vorschriften.  
Mikrobielle Kontaminationen sollten minimiert werden, da es sonst zu einer Zunahme unspezifischer Färbungen kommen kann.  
Die Verwendung anderer als den angegebenen Retrievals, Inkubationszeiten oder Temperaturen kann zu fehlerhaften Ergebnissen  
führen. Diesbezügliche Änderungen müssen vom Anwender selbst getestet werden.  
Gebrauchsanleitung  
Der Primärantikörper Melanoma Marker (HMB45) wird für den Einsatz in einem Bond-Färbeautomaten in Kombination mit Bond Polymer  
Refine Detection (DS9800) oder Bond Polymer Refine Red Detection (DS9390) empfohlen. Für den Primärantikörper Melanoma Marker  
(HMB45) werden die Färbeprotokolle IHC Protocol F bei Verwendung von Bond Polymer Refine Detection und IHC Protocol J bei  
Verwendung von Bond Polymer Refine Red Detection empfohlen. Die enzymatische Vorbehandlung wird unter Verwendung des Bond  
Enzyme 1 für 5 Minuten empfohlen.  
Erwartete Ergebnisse  
Normale Gewebe  
Melanoma Marker (HMB45) zeigte positive granuläre, zytoplasmatische Färbung in Melanozyten in der Basalschicht der Epidermis. Alle  
anderen normalen Gewebe waren negativ. (Gesamtanzahl der gefärbten Fälle = 99).  
Tumorgewebe  
Melanoma Marker (HMB45) färbte 13/13 malignen Melanomen. Bei verschiedenen anderen Tumoren war keine Färbung zu beobachten.  
(Gesamtanzahl der gefärbten Fälle = 101).  
Melanoma Marker (HMB45) wird zur Verwendung als Teil einer Gruppe von Antikörpern zur Diagnose von Melanomen  
empfohlen.  
Produktspezifische Einschränkungen  
Melanoma Marker (HMB45) wird für den Einsatz mit Bond Polymer Refine Detection oder Bond Polymer Refine Red Detection und Bond  
Hilfsreagenzien empfohlen. Anwender, die andere als die empfohlenen Testverfahren verwenden, müssen unter diesen Umständen die  
Verantwortung für die Auswertung der Patientenergebnisse übernehmen. Die Verfahrenszeiten können aufgrund von Unterschieden  
in der Gewebefixierung und der Wirksamkeit der Antigenverstärkung variieren und müssen empirisch bestimmt werden. Bei der  
Optimierung der Retrieval-Bedingungen und Verfahrenszeiten sollten negative Reagenzkontrollen eingesetzt werden.  
Fehlersuche  
Maßnahmen zur Abhilfe beim Auftreten von Fehlern finden Sie in Referenz 3.  
Falls Sie ungewöhnliche Färbeergebnisse beobachten, wenden Sie sich an Ihre örtliche Vertriebsfirma oder an die  
Regionalniederlassung von Leica Biosystems.  
Weitere Informationen  
Weitere Informationen zur Immunfärbung mit Bond-Reagenzien finden Sie in den Abschnitten Grundlegende Vorgehensweise,  
Erforderliches Material, Probenvorbereitung, Qualitätskontrolle, Assay-Verifizierung, Deutung der Färbung, Schlüssel der Symbole auf  
den Etiketten und Allgemeine Einschränkungen in “Das Arbeiten mit Bond-Reagenzien” in Ihrem Bond-Benutzerhandbuch.  
Bibliografie  
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.  
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious  
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.  
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.  
4. Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, et al. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated  
with immature Melanoma Markers. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1992; 40(2):207-212.  
5. Gown AM, Vogel AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocytic tumours distinguish subpopulations of  
melanocytes. American Journal of Pathology. 1986;123(2):195-203.  
ProClin950 ist eine Marke von Supelco, einem Unternehmen der Sigma-Aldrich Corporation.  
Ausgabedatum  
09 Mai 2013  
PA0027  
 
Page 9  
Anticuerpo Primario Listo Para Usar Bond™  
Melanoma Marker (HMB45)  
Catálogo Nº.: PA0027  
Indicaciones de Uso  
Este reactivo es para uso diagnóstico in vitro.  
El anticuerpo monoclonal Melanoma Marker (HMB45) está pensado para su utilización en la identificación cualitativa mediante  
microscopía ligera del antígeno humano HMB45 en tejido fijado en formol y embebido en parafina mediante tinción inmunohistoquímica  
utilizando un sistema automatizado Bond.  
La interpretación clínica de cualquier tinción o de la ausencia de ésta debe complementarse con estudios morfológicos y controles  
adecuados, y debe evaluarla un patólogo cualificado junto con el historial clínico del paciente y con otras pruebas diagnósticas.  
Resumen y Explicación  
Las técnicas inmunohistoquímicas pueden ser utilizadas para detectar la presencia de antígenos en tejidos y células (véase “Utilización  
de reactivos Bond” en la documentación de usuario suministrada por Bond). El anticuerpo primario Melanoma Marker (HMB45) es un  
producto listo para utilizar recomendado para su utilización tanto con Bond Polymer Refine Detection como con Bond Polymer Refine  
Red Detection. La demostración del antígeno humano HMB45 se consigue permitiendo, en primer lugar, la fijación de Melanoma  
Marker (HMB45) a la sección y, a continuación, visualizando esta fijación por medio de los reactivos que se facilitan en el sistema de  
detección. El uso de estos productos, en combinación con el sistema automatizado Bond, reduce la posibilidad de errores humanos y la  
variabilidad inherente resultante de la dilución de cada reactivo, el pipeteo manual y la aplicación del reactivo.  
Reactivos Suministrados  
Melanoma Marker (HMB45) es un anticuerpo monoclonal antihumano de ratón que se produce como sobrenadante en cultivos de tejido  
y se suministra en solución salina tamponada de Tris con proteína portadora, que contiene el 0,35% de ProClin950 como conservante.  
Volumen total = 7 mL.  
Clon  
HMB45.  
Inmunógeno  
Extracto de la metástasis del melanoma pigmentado de los nódulos linfáticos.  
Especificidad  
Antígeno humano HMB45.  
Subclase  
IgG1, Kappa.  
Concentración Total de Proteína  
Aprox. 10 mg/mL.  
Concentración de Anticuerpos  
Mayor o igual que 1,3 mg/L según lo determinado mediante ELISA.  
Dilución y Mezcla  
El anticuerpo Melanoma Marker (HMB45) se presenta en dilución óptima para su uso en el sistema Bond. No es necesaria la  
reconstitución, mezcla, dilución o titulación de este reactivo.  
Material Necesario Pero No Suministrado  
Consulte, en el apartado “Uso de reactivos Bond” de la documentación de usuario de Bond, la lista completa del material necesario para  
el tratamiento de las muestras y la tinción inmunohistoquímica cuando se utiliza el sistema Bond.  
Conservación y Estabilidad  
Debe conservarse a 2–8 °C. No se debe utilizar después de la fecha de caducidad que aparece en la etiqueta del recipiente.  
Los signos que indican contaminación y/o inestabilidad de Melanoma Marker (HMB45) son: turbidez de la solución, aparición de olor y  
presencia de precipitado.  
Volver a guardar a 2–8 °C inmediatamente después de su uso.  
Si las condiciones de conservación son diferentes de las especificadas, el usuario debe realizar las comprobaciones necesarias1.  
Precauciones  
Este producto es para uso diagnóstico in vitro.  
La concentración de ProClin950 es 0,35%. Contiene el principio activo 2-metil-4-isotiazolin-3-ona, que puede producir irritación en  
la piel, ojos, mucosas y tracto respiratorio superior. Lleve siempre guantes desechables cuando manipule los reactivos.  
Para obtener una copia de la Hoja de datos de seguridad de los materiales, póngase en contacto con el distribuidor local o con la  
PA0027  
 
Page 10  
Las muestras, antes y después de ser fijadas, y cualquier material en contacto con ellas, deben ser tratados como sustancias  
capaces de transmitir infecciones y deben desecharse con las precauciones correspondientes2. No pipetee nunca los reactivos con  
la boca, y evite el contacto de la piel y las mucosas con reactivos o muestras. Si los reactivos o las muestras entran en contacto con  
zonas sensibles, lávelas enseguida con abundante agua. Consulte a un médico.  
Consulte la normativa federal, nacional o local referente a la eliminación de sustancias potencialmente tóxicas.  
Minimice la contaminación microbiana de los reactivos, ya que puede producir un aumento de las tinciones inespecíficas.  
Los tiempos de exposición e incubación, y las temperaturas diferentes de las especificadas pueden dar resultados erróneos.  
Cualquier cambio que se produzca deberá ser validado por el usuario.  
Instrucciones de Uso  
El anticuerpo primario Melanoma Marker (HMB45) se recomienda para su utilización en un sistema automatizado Bond en combinación  
tanto con Bond Polymer Refine Detection (DS9800) como con Bond Polymer Refine Red Detection (DS9390). Los protocolos de tinción  
recomendados para el anticuerpo primario Melanoma Marker (HMB45) son el IHC Protocol F cuando se utiliza con Bond Polymer  
Refine Detection y el IHC Protocol J cuando se utiliza con Bond Polymer Refine Red Detection. Se recomienda el tratamiento previo con  
enzimas usando Bond Enzyme 1 durante 5 minutos.  
Resultados Esperados  
Tejidos Normales  
El anticuerpo Melanoma Marker (HMB45) presentó una tinción citoplasmática granular positiva de los melanocitos de la capa basal de  
la epidermis. El resto de tejidos normales resultaron negativos. (Número total de casos con tinción = 99).  
Tejidos Tumorales  
El anticuerpo Melanoma Marker (HMB45) produjo tinción en 13/13 melanomas malignos. No se observó tinción en otros tumores de  
diversos tipos. (Número total de casos con tinción = 101).  
El anticuerpo Melanoma Marker (HMB45) se recomienda para su utilización como parte de un panel de anticuerpos para el  
diagnóstico de melanomas.  
Limitaciones Específicas del Producto  
El anticuerpo Melanoma Marker (HMB45) se recomienda para su utilización tanto con Bond Polymer Refine Detection como con Bond  
Polymer Refine Red Detection y con reactivos secundarios Bond. Los usuarios que se aparten de los procedimientos de análisis  
recomendados deben asumir la responsabilidad de interpretar los resultados del paciente tomando en cuenta estas circunstancias. Los  
tiempos del protocolo pueden diferir debido a las variaciones en la fijación de los tejidos y en la eficacia de la preservación del antígeno,  
y deben determinarse empíricamente. Se debe utilizar controles negativos con reactivos a la hora de optimizar las condiciones de  
detección y los tiempos de protocolo.  
Resolución de Problemas  
Consulte la referencia 3 para ver las acciones correctoras.  
Contacte con su distribuidor local o con la oficina regional de Leica Biosystems para informar de cualquier tinción anómala.  
Más Información  
Para obtener más información sobre inmunotinciones con reactivos Bond, consulte los apartados Principio del procedimiento, Material  
necesario, Preparación de las muestras, Control de calidad, Verificación del análisis, Interpretación de la tinción, Clave de símbolos en  
las etiquetas y Limitaciones generales de la sección “Utilización de reactivos Bond” de la documentación de usuario suministrada por  
Bond.  
Bibliografía  
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.  
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious  
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.  
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.  
4. Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, et al. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated  
with immature Melanoma Markers. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1992; 40(2):207-212.  
5. Gown AM, Vogel AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocytic tumours distinguish subpopulations of  
melanocytes. American Journal of Pathology. 1986;123(2):195-203.  
ProClin950 es una marca registrada de Supelco, parte de Sigma-Aldrich Corporation.  
Fecha de Publicación  
09 de mayo de 2013  
PA0027  
 
Page 11  
Anticorpo Primário Pronto A Usar Bond™  
Melanoma Marker (HMB45)  
Nº de Catálogo: PA0027  
Utilização Prevista  
Este reagente destina-se a utilização diagnóstica in vitro.  
O anticorpo monoclonal Melanoma Marker (HMB45) está previsto para ser utilizado para a identificação qualitativa por microscopia  
óptica do antigénio HMB45 humanizado em tecido impregnado em parafina e fixado em formalina, por coloração imunohistoquímica  
utilizando um sistema Bond automatizado.  
A interpretação clínica de qualquer coloração ou da sua ausência deve ser complementada por estudos morfológicos utilizando  
controlos adequados, e deve ser avaliada no contexto da história clínica do doente e de outros testes complementares de diagnóstico  
por um anátomo-patologista qualificado.  
Resumo e Explicação  
As técnicas de imunohistoquímica podem ser utilizadas para demonstrar a presença de antigénios em tecidos e células (ver “Utilizar  
os Reagentes Bond” na documentação do utilizador Bond). O anticorpo primário Melanoma Marker (HMB45) é um produto pronto a  
usar, recomendado para ser utilizado com Bond Polymer Refine Detection ou Bond Polymer Refine Red Detection. A demonstração  
de antigénio HMB45 humanizado é conseguida permitindo primeiro a ligação do Melanoma Marker (HMB45) ao corte e posterior  
observação desta ligação utilizando os reagentes fornecidos com o sistema de detecção. A utilização destes produtos, em combinação  
com o sistema Bond automatizado, reduz a possibilidade de erro humano e da variabilidade inerente resultante da diluição do reagente  
individual, pipetagem manual e aplicação de reagente.  
Reagentes Fornecidos  
Melanoma Marker (HMB45) é um anticorpo monoclonal anti-humano de ratinho produzido como sobrenadante de cultura tecidular e  
fornecido em solução salina com tampão Tris com proteína transportadora, contendo 0,35% de ProClin950 como conservante.  
Volume total = 7 mL.  
Clone  
HMB45.  
Imunogénio  
Extracto de metástases de melanoma pigmentadas, retiradas de gânglios linfáticos.  
Especificidade  
Antigénio HMB45 humanizado.  
Subclasse  
IgG1, Kappa.  
Concentração de Proteínas Totais  
Aproximadamente 10 mg/mL.  
Concentração de Anticorpos  
Maior ou igual a 1,3 mg/L conforme determinado por ELISA.  
Diluição e Mistura  
O anticorpo primário Melanoma Marker (HMB45) apresenta-se com uma diluição ideal para utilização no sistema Bond. Não é  
necessária reconstituição, mistura, diluição ou titulação deste reagente.  
Material Necessário, Mas Não Fornecido  
Consultar “Usar os reagentes Bond” na sua documentação do utilizador Bond para uma lista completa de materiais necessários para  
tratamento de amostras e coloração imunohistoquímica usando o sistema Bond.  
Armazenamento e Estabilidade  
Armazene entre 2–8 °C. Não utilize após o fim do prazo de validade referido no rótulo do recipiente.  
Os sinais que indicam contaminação e/ou instabilidade de Melanoma Marker (HMB45) são: turvação da solução, desenvolvimento de  
odor e presença de precipitado.  
Coloque entre 2–8 °C imediatamente depois de utilizar.  
Condições de armazenamento diferentes das acima especificadas devem ser confirmadas pelo utilizador 1  
.
Precauções  
Esteproduto destina-se a utilização diagnóstica in vitro.  
A concentração de ProClin950 é de 0,35%. Contém o ingrediente activo 2-metil-4-isotiazolina-3-a e pode provocar irritação da  
pele, olhos, membranas mucosas e vias aéreas superiores. Use luvas descartáveis quando manipular os reagentes.  
Para obter uma cópia da Ficha de Dados de Segurança do Material, entre em contacto com o seu distribuidor local ou sucursal  
PA0027  
Page 12  
 
As amostras, antes e depois da fixação, e todo o material que a elas seja exposto, devem ser manipulados como se fossem capazes  
de transmitir infecção e eliminados usando as precauções adequadas2. Nunca pipete reagentes com a boca e evite o contacto entre  
a pele e membranas mucosas com reagentes ou amostras. Se reagentes ou amostras entrarem em contacto com áreas sensíveis,  
lave com uma quantidade abundante de água. Consulte um médico.  
Consulte os regulamentos federais, estatais e locais relativamente à eliminação de quaisquer componentes potencialmente tóxicos.  
Minimize a contaminação microbiana dos reagentes ou poderá ocorrer um aumento da coloração inespecífica.  
A utilização de tempos e temperaturas de recuperação e incubação diferentes dos especificados pode produzir resultados erróneos.  
Qualquer alteração deste tipo deve ser validada pelo utilizador.  
Instruções de Utilização  
O anticorpo primário Melanoma Marker (HMB45) está recomendado para ser utilizado num sistema Bond automatizado em combinação  
com Bond Polymer Refine Detection (DS9800) ou Bond Polymer Refine Red Detection (DS9390). Os protocolos de coloração  
recomendados para anticorpo primário Melanoma Marker (HMB45) são IHC Protocol F quando for utilizado Bond Polymer Refine  
Detection e IHC Protocol J quando for utilizado Bond Polymer Refine Red Detection. Recomenda-se pré-tratamento enzimático  
utilizando Bond Enzyme 1 durante 5 minutos.  
Resultados Esperados  
Tecidos Normais  
Melanoma Marker (HMB45) evidenciou coloração granular citoplasmática positiva em melanócitos na camada basal da epiderme. Todos  
os outros tecidos normais estavam negativos. (Número total de casos corados = 99).  
Tecidos Tumorais  
Melanoma Marker (HMB45) corou 13/13 melanossarcomas. Não foi observada coloração numa variedade de outros tumores. (Número  
total de casos corados = 101).  
Melanoma Marker (HMB45) está recomendado para ser utilizado como parte de um painel de anticorpos para o diagnóstico de  
melanomas.  
Limitações Específicas do Produto  
Melanoma Marker (HMB45) está recomendado para ser utilizado com Bond Polymer Refine Detection ou Bond Polymer Refine Red  
Detection e reagentes Bond auxiliares. Os utilizadores que se desviem dos procedimentos de teste recomendados devem assumir a  
responsabilidade pela interpretação dos resultados dos doentes nestas circunstâncias. Os tempos de protocolo podem variar, devido  
a variações na fixação tecidular e na eficácia da valorização com antigénios, devendo ser determinados de forma empírica. Devem ser  
utilizados controlos de reagente negativos quando se optimizam as condições de recuperação e os tempos do protocolo.  
Resolução de Problemas  
Consulte a referência 3 para acções de resolução.  
Entre em contacto com o seu distribuidor local ou com a sucursal regional da Leica Biosystems para notificar qualquer coloração pouco  
habitual.  
Informações Adicionais  
Poderá encontrar informações adicionais sobre imunocoloração com reagentes Bond nas secções de Princípios do Procedimento,  
Material Necessário, Preparação da Amostra, Controlo de Qualidade, Verificação do Ensaio, Interpretação da Coloração, Significado  
dos Símbolos nos Rótulos e Limitações Gerais em “Utilizar os Reagentes Bond” na sua documentação do utilizador Bond.  
Bibliografia  
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.  
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious  
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.  
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.  
4. Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, et al. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated  
with immature Melanoma Markers. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1992; 40(2):207-212.  
5. Gown AM, Vogel AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocytic tumours distinguish subpopulations of  
melanocytes. American Journal of Pathology. 1986;123(2):195-203.  
ProClin950 é uma marca registada de Supelco, parte da Sigma-Aldrich Corporation.  
Data de Emissão  
09 de Maio de 2013  
PA0027  
 
Page 13  
BondPrimär Antikropp - Färdig Att Användas  
Melanoma Marker (HMB45)  
Artikelnummer: PA0027  
Användningsområde  
Reagenset är avsett för in vitro-diagnostik.  
Melanoma Marker (HMB45) monoklonal antikropp är avsedd att användas för kvalitativ identifiering med ljusmikroskopi av mänskliga  
HMB45-antigener i formalinfixerad, paraffininbäddad vävnad med hjälp av immunohistokemisk infärgning med ett automatiserat Bond-  
system.  
Den kliniska tolkningen av varje infärgning, eller utebliven infärgning, måste alltid kompletteras med morfologiska studier och lämpliga  
kontroller. Utvärderingen bör göras av kvalificerad patolog och inkludera patientens anamnes och övriga diagnostiktester.  
Förklaring och sammanfattning  
Med immunhistokemiska metoder kan man påvisa förekomsten av antigener i vävnad och celler (se “Använda Bond-reagens” i  
användardokumentationen från Bond). Melanoma Marker (HMB45) primär antikropp är en bruksklar produkt som rekommenderas för  
användning med antingen Bond Polymer Refine Detection eller Bond Polymer Refine Red Detection. Påvisning av mänskliga HMB45-  
antigener uppnås genom att man först möjliggör bindning av Melanoma Marker (HMB45) till snittet och sedan visualiserar bindningen  
med hjälp av det reagensmedel som medföljer avkänningssystemet. Användning av dessa produkter tillsammans med det automatiska  
Bond-systemet reducerar risken för mänskliga misstag och för den inherenta spridning som orsakas av individuell reagensutspädning,  
manuell pipettering och manuell reagenstillsättning.  
Ingående reagenser  
Melanoma Marker (HMB45) är en mus anti-human monoklonal antikropp, producerad som supernatant från cellkultur. Den levereras i  
trisbuffrad koksaltlösning med bärarprotein. Lösningen innehåller 0,35 % ProClin950 som konserveringsmedel.  
Total volym = 7 ml.  
Klon  
HMB45.  
Immunogen  
Extrakt av pigmenterade melanommetastaser från lymfkörtlar.  
Specificitet  
Mänsklig HMB45-antigen.  
Undergrupp  
IgG1, Kappa.  
Total proteinkoncentration  
Ungefär 10 mg/ml.  
Antikroppskoncentration  
Större än eller lika med 1,3 mg/l, enligt bestämning med ELISA.  
Spädning och blandning  
Melanoma Marker (HMB45) är optimalt utspädd för användning på ett Bond-system. Denna reagens behöver varken rekonstitueras,  
blandas, spädas eller titreras.  
Nödvändig materiel som ej medföljer  
I “Använda Bond-reagens” i Bond-användardokumentationen finns en fullständig lista med den materiel du behöver för att behandla ett  
prov och göra en immunhistokemisk färgning med Bond-systemet.  
Förvaring och stabilitet  
Förvara vid 2–8 °C. Använd inte efter det utgångsdatum som anges på flaskans etikett.  
Tecken som indikerar kontaminering och/eller instabilitet hos Melanoma Marker (HMB45) är: grumling i lösningen, luktutveckling och  
förekomst av fällning.  
Ställ tillbaka i 2–8 °C omedelbart efter användning.  
Andra förvaringsbetingelser än de ovan angivna måste verifieras av användaren1.  
Säkerhetsåtgärder  
Produkten är avsedd för in vitro-diagnostik.  
(tm)  
Koncentrationen av ProClin 950 är 0,35 %. Den aktiva ingrediensen 2-metyl-4-isotiazolin-3-on kan orsaka irritation av hud, ögon,  
slemhinnor och de övre luftvägarna. Använd engångshandskar när du hanterar reagens.  
Du kan få tag på ett säkerhetsdatablad genom att kontakta en lokal distributör eller Leica Biosystems regionkontor, eller besöka Leica  
PA0027  
 
Page 14  
Prover, både före och efter fixering, samt all materiel som exponeras för dem, bör behandlas och avfallshanteras som potentiellt  
smittbärande material2. Munpipettera aldrig reagens och undvik att hud eller slemhinnor kommer i kontakt med reagens eller prover.  
Om reagens eller prover skulle komma i kontakt med känsliga områden bör du tvätta dig med rikliga mängder vatten. Kontakta  
läkare.  
Angående avfallshantering av potentiellt toxiska material hänvisar vi till gällande europeiska, nationella och lokala bestämmelser och  
förordningar.  
Minimera mikrobiologisk kontamination av reagenser, annars kan en ökad icke-specifik infärgning bli resultatet.  
Retrieval, inkubationstider eller temperaturer som avviker mot dem angivna kan ge felaktiga resultat. Varje sådan förändring måste  
valideras av användaren.  
Bruksanvisning  
Melanoma Marker (HMB45) primär antikropp rekommenderas för användning i ett automatiserat Bond-system i kombination med  
antingen Bond Polymer Refine Detection (DS9800) eller Bond Polymer Refine Red Detection (DS9390). De infärgningsprotokoll som  
rekommenderas för Melanoma Marker (HMB45) primär antikropp är IHC Protocol F när du använder Bond Polymer Refine Detection  
och IHC Protocol J när du använder Bond Polymer Refine Red Detection. Enzymförbehandling rekommenderas med Bond Enzyme 1 i  
5 minuter.  
Förväntade resultat  
Normala vävnader  
Melanoma Marker (HMB45) uppvisade positiv granulär cytoplasmisk infärgning i melanocyterna i epidermis basala lager. Alla andra  
normala vävnader var negativa. (Totalt antal infärgade objekt = 99.)  
Tumörvävnader  
Melanoma Marker (HMB45) färgade in 13/13 maligna melanom. Ingen infärgning noterades i en mängd andra tumörer. (Totalt antal  
infärgade objekt = 101.)  
Melanoma Marker (HMB45) rekommenderas för användning som en del av en antikroppspanel för diagnostisering av melanom.  
Produktspecifika begränsningar  
Melanoma Marker (HMB45) rekommenderas för användning med antingen Bond Polymer Refine Detection eller Bond Polymer  
Refine Red Detection och Bond-stödreagensmedel. Användare som inte följer rekommenderade testprotokoll måste ta på sig  
ansvaret för att korrekt tolka patientresultat under dessa förhållanden. Som följd av variationer i vävnadsfixering och effektivitet hos  
antigenförstärkningen kan protokollets tider variera och de måste fastställas empiriskt. Negativa reagenskontroller bör användas när du  
optimerar återvinningsbetingelser och protokolltider.  
Felsökning  
Se referens 3 för förslag till åtgärder.  
Kontakta en lokal distributör eller Leica Biosystems regionkontor för att rapportera onormal infärgning.  
Mer information  
Mer information om immunfärgning med Bond-reagens finns under rubrikerna Bakgrund till metoden, Nödvändig materiel, Förbereda  
provet, Kvalitetskontroll, Verifiering av assayer, Tolka infärgningsresultat, Symbolförklaring för etiketter och Allmänna begränsningar i  
“Använda Bond-reagens” i Bonds användardokumentation.  
Bibliografi  
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.  
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious  
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.  
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.  
4. Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, et al. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated  
with immature Melanoma Markers. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1992; 40(2):207-212.  
5. Gown AM, Vogel AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocytic tumours distinguish subpopulations of  
melanocytes. American Journal of Pathology. 1986;123(2):195-203.  
ProClin950 är ett varumärke tillhörande Supelco som ingår i Sigma-Aldrich Corporation.  
Utgivningsdatum  
09 maj 2013  
PA0027  
 
Page 15  
Έτοιμο Για Χρήση Πρωτογενές Αντίσωμα Bond™  
Melanoma Marker (HMB45)  
Αρ. Καταλόγου: PA0027  
Σκοπός Χρήσης  
Αυτό το αντιδραστήριο προορίζεται για in vitro διαγνωστική χρήση.  
Το μονοκλωνικό αντίσωμα Melanoma Marker (HMB45) προορίζεται για την ποιοτική ταυτοποίηση (μέσω μικροσκοπίας φωτός)  
του ανθρώπινου αντιγόνου HMB45, σε μονιμοποιημένους σε φορμαλδεΰδη και σκηνωμένους σε παραφίνη ιστούς με χρήση  
ανοσοϊστοχημικής χρώσης σε αυτοματοποιημένο σύστημα Bond.  
Η κλινική ερμηνεία οποιασδήποτε χρώσης ή της απουσίας της θα πρέπει να συμπληρώνεται με μορφολογικές μελέτες και σωστούς  
μάρτυρες και θα πρέπει να αξιολογείται στα πλαίσια του κλινικού ιστορικού του ασθενούς και άλλων διαγνωστικών εξετάσεων από  
ειδικευμένο παθολογοανατόμο.  
Περίληψη και Επεξήγηση  
Μπορούν να χρησιμοποιηθούν ανοσοϊστοχημικές μέθοδοι για την κατάδειξη της παρουσίας αντιγόνων στον ιστό και τα κύτταρα (δείτε  
“Χρήση αντιδραστηρίων Bond” στην τεκμηρίωση χρήσης του Bond). Το πρωτεύον αντίσωμα Melanoma Marker (HMB45) είναι ένα έτοιμο  
για χρήση προϊόν, που συνιστάται για χρήση είτε μαζί με το Bond Polymer Refine Detection είτε μαζί με το Bond Polymer Refine Red  
Detection. Η ανάδειξη του ανθρώπινου αντιγόνου HMB45 επιτυγχάνεται με την πρόσδεση του Melanoma Marker (HMB45) στην τομή και  
την ακόλουθη οπτικοποίηση αυτής της πρόσδεσης με χρήση αντιδραστηρίων που συνοδεύουν το σύστημα ανίχνευσης. Η χρήση αυτών  
των προϊόντων, σε συνδυασμό με το αυτοματοποιημένο σύστημα Bond-, μειώνει την πιθανότητα του ανθρώπινου σφάλματος και την  
εγγενή ποικιλότητα που προκαλείται από αραίωση συγκεκριμένου αντιδραστηρίου, χειροκίνητη αναρρόφηση με πιπέτα και εφαρμογή  
αντιδραστηρίου.  
Αντιδραστήρια που Παρέχονται  
Το Melanoma Marker (HMB45) είναι ένα μονοκλωνικό αντι-ανθρώπινο αντίσωμα ποντικού που παράγεται ως υπερκείμενο  
ιστοκαλλιέργειας και παρέχεται σε αλατούχο ρυθμιστικό διάλυμα Tris με πρωτεΐνη φορέα που περιέχει 0,35% ProClin950 ως  
συντηρητικό.  
Συνολικός όγκος = 7 mL.  
Κλώνος  
HMB45.  
Ανοσογόνο  
Υλικό μεταστάσεων μελαγχρωματικού μελανώματος από λεμφαδένες.  
Ειδικότητα  
Ανθρώπινο αντιγόνο HMB45.  
Υποκατηγορία  
IgG1, Kappa.  
Συνολική Συγκέντρωση Πρωτεΐνης  
Περίπου 10 mg/mL.  
Συγκέντρωση Αντισώματος  
Μεγαλύτερη ή ίση με 1,3 mg/L, όπως προσδιορίζεται με ELISA.  
Αραίωση και Aνάμειξη  
Το πρωτογενές αντίσωμα Melanoma Marker (HMB45) αραιώνεται βέλτιστα για χρήση στο σύστημα Bond. Δεν απαιτείται ανασύσταση,  
ανάμειξη, αραίωση ή τιτλοδότηση αυτού του αντιδραστηρίου.  
Υλικά Που Απαιτούνται Αλλά Δεν Παρέχονται  
Για μια πλήρη λίστα των υλικών που απαιτούνται για την επεξεργασία δειγμάτων και την ανοσοϊστοχημική χρώση με τη χρήση του  
συστήματος Bond-, ανατρέξτε στην ενότητα “Χρήση αντιδραστηρίων Bond” στο υλικό τεκμηρίωσης χρήσης της Bond.  
Φύλαξη και Σταθερότητα  
Φύλαξη στους 2–8 °C. Μη το χρησιμοποιήσετε μετά την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα του δοχείου.  
Τα σημεία που υποδεικνύουν μόλυνση ή/και αστάθεια του Melanoma Marker (HMB45) είναι: θολότητα του διαλύματος, δημιουργία οσμής  
και παρουσία ιζήματος.  
Επαναφέρετε στους 2–8 °C αμέσως μετά τη χρήση.  
Συνθήκες φύλαξης εκτός από αυτές που καθορίζονται παραπάνω πρέπει να επαληθεύονται από τον χρήστη1.  
Προφυλάξεις  
Αυτό το προϊόν προορίζεται για διαγνωστική χρήση in vitro.  
Η συγκέντρωση του ProClin950 είναι 0,35%. Περιέχει το ενεργό συστατικό 2-methyl-4-isothiazolin-3-one και μπορεί να προκαλέσει  
ερεθισμό του δέρματος, των ματιών, των βλεννογόνων μεμβρανών και της ανώτερης αναπνευστικής οδού. Φοράτε γάντια μίας  
χρήσης όταν χειρίζεστε αντιδραστήρια.  
PA0027  
Page 16  
 
Αν θέλετε ένα αντίγραφο του Material Safety Data Sheet [Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Υλικού], επικοινωνήστε με τον αντιπρόσωπο  
ή το περιφερειακό γραφείο της Leica Biosystems, ή εναλλακτικά, επισκεφθείτε τον ιστότοπο της Leica Biosystems,  
Ο χειρισμός των δειγμάτων, πριν και μετά τη μονιμοποίηση και όλων των υλικών που εκτίθενται σε αυτά, θα πρέπει να γίνεται  
σαν να ήταν ικανά να μεταδώσουν μόλυνση και θα πρέπει να απορρίπτονται λαμβάνοντας κατάλληλες προφυλάξεις2. Μην κάνετε  
ποτέ αναρρόφηση αντιδραστηρίων με πιπέτα με το στόμα και αποφύγετε να έρθει σε επαφή το δέρμα και οι βλεννογόνοι με τα  
αντιδραστήρια ή τα δείγματα. Αν αντιδραστήρια ή δείγματα έρθουν σε επαφή με ευαίσθητες περιοχές, πλύνετέ τις με άφθονο νερό.  
Ζητήστε ιατρική συμβουλή.  
Συμβουλευτείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς ή τοπικούς κανονισμούς για απόρριψη τυχόν δυνητικώς τοξικών συστατικών.  
Ελαχιστοποιήστε τη μικροβιακή μόλυνση των αντιδραστηρίων, διαφορετικά μπορεί να υπάρξει αύξηση σε μη ειδική χρώση.  
Ανάκτηση, χρόνοι επώασης ή θερμοκρασίες διαφορετικές από τις καθορισμένες, μπορεί να οδηγήσουν σε εσφαλμένα αποτελέσματα.  
Οποιαδήποτε τέτοια αλλαγή πρέπει να επικυρώνεται από τον χρήστη.  
Οδηγίες Χρήσης  
Το πρωτεύον αντίσωμα Melanoma Marker (HMB45) συνιστάται για χρήση σε αυτοματοποιημένο σύστημα Bond είτε μαζί με το Bond  
Polymer Refine Detection (DS9800) είτε μαζί με το Bond Polymer Refine Red Detection (DS9390). Τα συνιστώμενα πρωτόκολλα χρώσης  
για το πρωτεύον αντίσωμα Melanoma Marker (HMB45) είναι το πρωτόκολλο IHC Protocol F όταν χρησιμοποιείται το Bond Polymer  
Refine Detection και το πρωτόκολλο IHC Protocol J όταν χρησιμοποιείται το Bond Polymer Refine Red Detection. Συνιστάται ενζυμική  
προκατεργασία με χρήση του Bond Enzyme 1 για 5 λεπτά.  
Αναμενόμενα Αποτελέσματα  
Φυσιολογικοί Ιστοί  
Το Melanoma Marker (HMB45) ανέδειξε θετική, κοκκιώδη, κυτταροπλασματική χρώση σε μελανοκύτταρα της βασικής στιβάδας της  
επιδερμίδας. Όλοι οι υπόλοιποι φυσιολογικοί ιστοί ήταν αρνητικοί. (Συνολικός αριθμός χρωσμένων περιστατικών = 99).  
Νεοπλασματικοί Ιστοί  
Το Melanoma Marker (HMB45) χρωμάτισε 13 από 13 κακοήθη μελανώματα. Δεν παρατηρήθηκε χρώση σε διάφορους άλλους όγκους.  
(Συνολικός αριθμός χρωσμένων περιστατικών = 101).  
Το Melanoma Marker (HMB45) συνιστάται για χρήση ως μέρος ενός σετ αντισωμάτων για τη διάγνωση μελανωμάτων.  
Ειδικοί Περιορισμοί του Προϊόντος  
Το Melanoma Marker (HMB45) συνιστάται για χρήση είτε μαζί με το Bond Polymer Refine Detection είτε μαζί με το Bond Polymer Refine  
Red Detection και βοηθητικά αντιδραστήρια Bond. Οι χρήστες που παρεκκλίνουν από τις συνιστώμενες διαδικασίες εξέτασης, πρέπει να  
αναλάβουν την ευθύνη για την ερμηνεία των αποτελεσμάτων των ασθενών υπό αυτές τις συνθήκες. Οι χρόνοι του πρωτοκόλλου μπορεί  
να διαφέρουν λόγω της διαφοροποίησης στη μονιμοποίηση του ιστού και την αποτελεσματικότητα της ενίσχυσης του αντιγόνου και  
συνεπώς πρέπει να προσδιορίζονται εμπειρικά. Για τη βελτιστοποίηση των συνθηκών ανάκτησης και των χρόνων του πρωτοκόλλου θα  
πρέπει να χρησιμοποιούνται δείγματα αντιδραστηρίου αρνητικού ελέγχου.  
Αντιμετώπιση Προβλημάτων  
Ανατρέξτε στην παραπομπή 3 για τις διορθωτικές ενέργειες.  
Για να αναφέρετε περιπτώσεις ασυνήθιστης χρώσης, επικοινωνήστε με τον τοπικό σας διανομέα ή τα περιφερειακά γραφεία της Leica  
Biosystems.  
Πρόσθετες Πληροφορίες  
Μπορείτε να βρείτε περισσότερες πληροφορίες σχετικά με την ανοσοχρώση με αντιδραστήρια Bond, υπό τους τίτλους “Αρχή της  
διαδικασίας”, “Απαιτούμενα υλικά”, “Προετοιμασία δείγματος”, “Ποιοτικός έλεγχος”, “Επαλήθευση προσδιορισμού”, “Ερμηνεία της  
χρώσης”, “Υπόμνημα για τα σύμβολα στις ετικέτες” και “Γενικοί περιορισμοί” στην ενότητα “Χρήση αντιδραστηρίων Bond” στο υλικό  
τεκμηρίωσης χρήσης της Bond.  
Βιβλιογραφία  
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.  
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious  
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.  
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.  
4. Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, et al. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated  
with immature Melanoma Markers. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1992; 40(2):207-212.  
5. Gown AM, Vogel AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocytic tumours distinguish subpopulations of  
melanocytes. American Journal of Pathology. 1986;123(2):195-203.  
Το ProClin950 είναι εμπορικό σήμα της Supelco, τμήμα της Sigma-Aldrich Corporation.  
Ημερομηνία Έκδοσης  
09 Μαΐου 2013  
PA0027  
 
Page 17  
BondBrugsklart Primaert Antistof  
Melanoma Marker (HMB45)  
Katalognummer.: PA0027  
Tilsigtet Anvendelse  
Dette reagens er beregnet til in vitro diagnostik.  
Monoklonalt antistof til Melanoma Marker (HMB45) er beregnet til kvalitativ identificering med lysmikroskopi af humant HMB45-antigen i  
formalinfikseret, paraffinindlejret væv ved immunohistokemisk farvning ved hjælp af et automatiseret Bond-system.  
Den kliniske fortolkning af enhver farvning eller fravær af samme skal ledsages af morfologiske undersøgelser og egnede kontroller samt  
evalueres af en uddannet patolog, som ser fortolkningen i kontekst med patientens anamnese samt andre diagnostiske prøver.  
Resumé og Forklaring  
Immunhistokemiske teknikker kan anvendes til at påvise tilstedeværelsen af antigener i væv og celler (se “Anvendelse af Bond-  
reagenser” i Bond-brugervejledningen). Primært antistof til Melanoma Marker (HMB45) er et brugsklart produkt, som anbefales til brug  
sammen med enten Bond Polymer Refine Detection eller Bond Polymer Refine Red Detection. Påvisningen af humant HMB45-antigen  
opnås ved først at foretage binding af Melanoma Marker (HMB45) til området og derefter tydeliggøre denne binding ved hjælp af de  
reagenser, som stilles til rådighed i detekteringssystemet. Brugen af disse produkter sammen med det automatiske Bond-system  
reducerer risikoen for menneskelige fejl og variabilitet som følge af individuel reagensfortynding, manuel pipettering og reagenspåførsel.  
Leverede Reagenser  
Melanoma Marker (HMB45) er et muse-antihumant monoklonalt antistof produceret som en vævskultursupernatant, og leveret i Tris-  
bufferjusteret saltvandsopløsning med bæreprotein, indeholdende 0,35% ProClin950 som konserveringsmiddel.  
Volumen i alt = 7 ml.  
Klon  
HMB45.  
Immunogen  
Ekstrakt af pigmenterede melanommetastaser fra lymfeknuder.  
Specificitet  
Humant HMB45-antigen.  
Underklasse  
IgG1, Kappa.  
Total Proteinkoncentration  
Ca. 10 mg/ml.  
Antistofkoncentration  
Større end eller lig med 1,3 mg/l bestemt med ELISA.  
Fortynding og Blanding  
Melanoma Marker (HMB45) primært antistof er optimalt fortyndet til brug på Bond-systemet. Rekonstitution, blanding, fortynding eller  
titrering af dette reagens er ikke påkrævet.  
Nødvendige Materialer, Der Ikke Medfølger  
Der henvises til “Anvendelse af Bond-reagenser” i Bond-brugervejledningen for en komplet liste over materialer, der er nødvendige til  
præparatbehandling og immunhistokemisk farvning ved hjælp af Bond-systemet.  
Opbevaring og Stabilitet  
Opbevares ved 2–8 °C. Må ikke anvendes efter udløbsdatoen, som er angivet på etiketten på beholderen.  
Tegn, som indikerer, at Melanoma Marker (HMB45) er kontamineret og/eller instabilt: turbiditet af opløsningen, lugtudvikling og forekomst  
af præcipitat.  
Sættes tilbage til opbevaring ved 2–8 °C straks efter brug.  
Opbevaringsbetingelser, der adskiller sig fra de oven for specificerede, skal verificeres af brugeren1.  
Forholdsregler  
Dette produkt er beregnet til brug i in vitro-diagnostik.  
Koncentrationen af ProClin950 er 0,35 %. Det indeholder den aktive ingrediens 2-methyl-4-isothiazolin-3-one og kan give anledning  
til irritation af hud, øjne, slimhinder og øvre luftveje. Der skal anvendes engangshandsker ved håndtering af reagenserne.  
En kopi af sikkerhedsdatabladet, Material Safety Data Sheet (MSDS), kan fås ved henvendelse til den lokale distributør eller til Leica  
Præparater, både før og efter fiksering, samt alle materialer eksponeret for præparater, skal håndteres som værende i stand til at  
overføre infektion og skal bortskaffes med passende forholdsregler2. Afpipettér ikke reagenser med munden og undgå, at reagenser  
eller præparater kommer i kontakt med hud og slimhinder. Hvis reagenser eller præparater kommer i kontakt med følsomme områder,  
skal disse områder vaskes med rigelige mængder vand. Søg læge.  
PA0027  
 
Page 18  
Bortskaffelse af potentielt toksiske komponenter skal ske i overensstemmelse med gældende statslig eller lokal lovgivning.  
Mikrobiel kontaminering af reagenser skal minimeres for at undgå en øget uspecifik farvning.  
Genfinding og inkubationstider eller temperaturer, som afviger fra de specificerede, kan give fejlagtige resultater. Enhver ændring  
heraf skal valideres af brugeren.  
Brugsanvisning  
Primært antistof til Melanoma Marker (HMB45) anbefales til brug på et automatiseret Bond-system sammen med enten Bond Polymer  
Refine Detection (DS9800) eller Bond Polymer Refine Red Detection (DS9390). De anbefalede farvningsprotokoller for primært antistof  
til Melanoma Marker (HMB45) er IHC Protocol F ved brug af Bond Polymer Refine Detection og IHC Protocol J ved brug af Bond  
Polymer Refine Red Detection. Der anbefales enzymforbehandling med Bond Enzyme 1 i 5 minutter.  
Forventede Resultater  
Normalt Væv  
Melanoma Marker (HMB45) udviste positiv granuløs, cytoplasmisk farvning i melanocytter i overhudens basallag. Alle andre normale  
væv var negative. (Samlet antal farvede tilfælde = 99).  
Tumorvæv  
Melanoma Marker (HMB45) farvede 13/13 maligne melanomer. Der blev ikke observeret nogen farvning i flere forskellige andre tumorer.  
(Samlet antal farvede tilfælde = 101).  
Melanoma Marker (HMB45) anbefales til brug som del af et panel af antistoffer til diagnosticering af melanomer.  
Produktspecifikke Begrænsninger  
Melanoma Marker (HMB45) anbefales til brug med enten Bond Polymer Refine Detection eller Bond Polymer Refine Red Detection  
og Bond-hjælpereagenser. Brugere, som afviger fra de anbefalede testprocedurer, må under disse forhold selv tage ansvaret for  
fortolkningen af patientresultater. Protokoltiderne kan variere på grund af variation i vævsfiksering og effektiviteten i antigenfremhævning  
og skal bestemmes empirisk. Der skal anvendes negative reagenskontroller ved optimering af genfindingsforhold og protokoltider.  
Fejlfinding  
Se reference 3 for afhjælpende foranstaltninger.  
Kontakt venligst den lokale distributør eller Leica Biosystems’ regionale kontor for at rapportere usædvanlig farvning.  
Yderligere Oplysninger  
Yderligere oplysninger om immunfarvning med Bond-reagenser kan findes i “Anvendelse af Bond-reagenser” i Bond-brugervejledningen  
under overskrifterne Proceduremæssige principper, Nødvendige materialer, Præparatklargøring, Kvalitetskontrol, Analyseverifikation,  
Fortolkning af farvning, Nøgle til symboler på etiketter og Generelle begrænsninger.  
Bibliografi  
1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.  
2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious  
diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.  
3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.  
4. Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, et al. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated  
with immature Melanoma Markers. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1992; 40(2):207-212.  
5. Gown AM, Vogel AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocytic tumours distinguish subpopulations of  
melanocytes. American Journal of Pathology. 1986;123(2):195-203.  
ProClin950 er et varemærke tilhørende Supelco, en del af Sigma-Aldrich Corporation.  
Udgivelsesdato  
09 maj 2013  
PA0027  
 
Page 19  
PA0027  
Page 20  
 
PA0027  
Page 21  
 
PA0027  
Page 22  
 
Leica Biosystems Newcastle Ltd  
Balliol Business Park West  
Benton Lane  
Newcastle Upon Tyne NE12 8EW  
United Kingdom  
(
+44 191 215 4242  
© Leica Biosystems Newcastle Ltd 95.7947 Rev B PA0027 09/05/2013  
 

Leisure Time Telescope LX20 User Manual
Lenovo Laptop E130 User Manual
LG Electronics Cell Phone 4600 User Manual
LG Electronics DVD VCR Combo RC700N User Manual
LG Electronics Washer MFL31245109 User Manual
Lucent Technologies Server 2500 User Manual
Marantz Blu ray Player 541110333221M User Manual
Marantz CD Player CC4300N User Manual
Memorex VCR DBVT1341 User Manual
Metra Electronics Automobile Accessories 95 5820 User Manual